RNAprep 순수 세포/박테리아 키트
특징
■ 배양된 세포 및 박테리아 샘플에 대해 최적화된 버퍼 및 프로토콜은 프로세스를 간단하고 편리하게 만듭니다.
■ Unique DNase I은 genomic DNA 오염을 최소화합니다.
■ 독특한 RNase-Free Filtration Columns CS는 다른 오염 물질을 제거합니다.
■ 고순도 및 즉시 사용 가능한 RNA는 민감한 다운스트림 응용 분야에 적합합니다.
■ 페놀/클로로포름 추출, LiCl 및 에탄올 침전, CsCl 구배 원심분리가 필요하지 않아 공정이 안전하고 신뢰할 수 있습니다.
애플리케이션
■ RT-PCR.
■ 노던 블롯, 도트 블롯.
■ 실시간 PCR.
■ 칩 분석.
■ PolyA 스크리닝, 체외 번역, RNase 보호 분석 및 분자 복제.
모든 제품은 ODM/OEM용으로 사용자 정의할 수 있습니다. 자세한 내용은맞춤형 서비스(ODM/OEM)를 클릭하십시오.
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재료: 인간 Jurkat 세포(1×106 ) 방법: Human Jukat Cells의 total RNA는 RNAprep Pure Cell/Bacteria Kit를 사용하여 분리되었습니다. 결과: 위의 아가로스 겔 전기영동 사진을 참조하십시오. 레인당 50μl 용출액 2-4μl를 로딩했습니다. 전기영동은 1% agarose gel에서 6V/cm로 30분간 진행하였다. |
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재료: TOP10 대장균(1×108) 방법: RNAprep Pure Cell/Bacteria Kit를 이용하여 TOP10 E.coli의 total RNA를 분리하였다. 결과: 위의 아가로스 겔 전기영동 사진을 참조하십시오. 레인당 50μl 용출액 2-4μl를 로딩했습니다. 전기영동은 1% agarose gel에서 6V/cm로 30분간 진행하였다. |
A-1 세포 용해 또는 균질화가 충분하지 않음
---- 샘플 사용량을 줄이고, 용해 버퍼의 양을 늘리고, 균질화 및 용해 시간을 늘립니다.
A-2 샘플 양이 너무 큽니다.
---- 사용하는 샘플의 양을 줄이거나 lysis buffer의 양을 늘립니다.
A-1 불충분한 세포 용해 또는 균질화
---- 샘플 사용량을 줄이고, 용해 버퍼의 양을 늘리고, 균질화 및 용해 시간을 늘립니다.
A-2 샘플 양이 너무 큽니다.
----최대 처리 용량을 참조하십시오.
A-3 RNA가 컬럼에서 완전히 용출되지 않음
---- RNase-Free 물을 첨가한 후 원심분리하기 전에 몇 분 동안 그대로 두십시오.
A-4 용리액의 에탄올
---- 헹군 후 다시 원심분리하여 세척 완충액을 최대한 제거합니다.
A-5 세포 배양액이 완전히 제거되지 않음
---- 세포 채취 시 반드시 배양액을 최대한 제거하여 주십시오.
A-6 RNAstore에 저장된 세포는 효과적으로 원심분리되지 않습니다
----RNAstore 밀도는 평균 세포 배양 배지보다 큽니다. 따라서 원심력을 증가시켜야 합니다. 3000x g에서 원심분리하는 것이 좋습니다.
A-7 샘플의 낮은 RNA 함량 및 풍부도
---- 낮은 수율이 샘플로 인한 것인지 확인하려면 양성 샘플을 사용하십시오.
A-1 재료가 신선하지 않다
---- 신선한 조직은 즉시 액체 질소에 보관하거나 추출 효과를 보장하기 위해 RNAstore 시약에 즉시 넣어야 합니다.
A-2 샘플 양이 너무 큽니다.
---- 샘플 양을 줄입니다.
A-3 RNase 오염n
----키트에 포함된 버퍼에는 RNase가 포함되어 있지 않으나 추출 과정에서 RNase가 오염되기 쉬우므로 주의하여 다루어야 합니다.
A-4 전기영동 오염
---- 전기영동 버퍼를 교체하고 소모품과 로딩 버퍼에 RNase 오염이 없는지 확인하십시오.
A-5 전기영동을 위한 너무 많은 부하
---- 샘플 로딩의 양을 줄이고 각 웰의 로딩은 2 μg을 초과해서는 안됩니다.
A-1 샘플 양이 너무 큽니다.
---- 샘플 양을 줄입니다.
A-2 일부 샘플은 DNA 함량이 높아 DNase로 처리할 수 있습니다.
----얻은 RNA 용액에 RNase-Free DNase 처리를 수행하고 RNA는 처리 후 후속 실험에 직접 사용하거나 RNA 정제 키트로 추가 정제할 수 있습니다.
유리 제품의 경우 150°C에서 4시간 동안 굽습니다. 플라스틱 용기의 경우 0.5M NaOH에 10분간 담근 다음 RNase가 없는 물로 완전히 헹군 다음 멸균하여 RNase를 완전히 제거합니다. 실험에 사용된 시약이나 용액, 특히 물에는 RNase가 없어야 합니다. 모든 시약 준비에 RNase가 없는 물을 사용합니다(깨끗한 유리병에 물을 추가하고 DEPC를 0.1%(V/V)의 최종 농도로 추가하고 밤새 흔들어 오토클레이브).
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